Тип публикации: статья из журнала
Год издания: 2026
Идентификатор DOI: 10.7868/S3034574X26030099
Ключевые слова: tick-borne encephalitis virus (TBEV), split NanoLuc complementation, bioluminescence, reagent kit, вирус клещевого энцефалита (ВКЭ), комплементация фрагментов люциферазы NanoLuc, биолюминесцентный, набор реагентов
Аннотация: Для быстрого тестирования клещей на выявление носителей вируса клещевого энцефалита (ВКЭ) предложен вариант однофазного биолюминесцентного иммуноанализа конкурентного типа. Он основан на комплементации фрагментов расщепленной люциферазы NanoLuc, которая наблюдается при их сближении в результате образования иммунокомплекса анти-ВКЭ Показать полностьюминиантитела и фрагмента капсидного белка Е вируса, генетически слитых с фрагментами люциферазы. При этом восстанавливается субстрат-зависимая биолюминесценция, составляющая 2,4 % полноразмерной NanoLuc. Присутствие ВКЭ-ассоциированных мишеней, конкурирующих за связывание с миниантителом, вызывает разрушение иммунокомплекса и падение биолюминесцентного сигнала. Цель исследования - получение лиофилизированного реагента «все в одном», в состав которого входят гибридные белки и субстрат реакции, для проведения быстрого тестирования образца клеща на носительство ВКЭ. Показана пригодность полученного реагента для выявления ВКЭ после хранения в течение 3 месяцев при 5 °С. Для тестирования достаточно добавить экстракт клеща к лиофилизированному реагенту, при этом отсутствуют стадии промывки, длительного инкубирования, добавления реагентов и пр. В аналитическую систему входят необходимые лиофилизированные образцы положительного и отрицательного контролей. A single-phase competitive bioluminescence immunoassay is proposed for rapid testing of ticks for tick-borne encephalitis virus (TBEV) carriers. It is based on the complementation of split NanoLuc luciferase, forced by the formation of biospecific complexes of genetically fused anti-TBEV miniantibody and an immunogenic fragment of the viral capsid protein E. The substrate (furimazine)-dependent bioluminescence of the complex is 2.5% that of the full-length NanoLuc and exhibits similar signal kinetics. The presence of TBEV-associated targets competing for binding to the miniantibody causes destruction of the immunocomplex and a decrease in the bioluminescence signal. The study yielded a lyophilized reagent sample containing fusion proteins, the substrate furimazine, and bovine serum albumin as a stabilizer. The reagent's suitability for detecting TBEV in tick samples after storage for 3 months at 5°C was demonstrated. Testing is performed simply by adding tick extract to the lyophilized reagent; there are no washing, incubation, reagent addition, or other steps. The analytical system includes lyophilized positive and negative control samples.
Журнал: Прикладная биохимия и микробиология
Выпуск журнала: Т.62, №3
Номера страниц: 450-457
ISSN журнала: 05551099
Место издания: Москва
Издатель: Российская академия наук, Федеральный исследовательский центр "Фундаментальные основы биотехнологии" РАН, Российская академия наук, Отделение биохимии, биофизики и химии физиологически активных соединений РАН