Тип публикации: статья из журнала
Год издания: 2025
Идентификатор DOI: 10.20333/25000136-2025-6-84-92
Ключевые слова: breast cancer, aptamers, flow cytometry, Selex, Circulating tumour cells, diagnosis, рак молочной железы, аптамеры, проточная цитометрия, циркулирующие опухолевые клетки, диагностика
Аннотация: Цель исследования. Селекция высокоспецифичных ДНК-аптамеров для детекции циркулирующих опухолевых клеток (ЦОК) в периферической крови пациенток с раком молочной железы (РМЖ) и разработка проточно-цитометрического метода детекции ЦОК на основе пула аптамеров. Материал и методы. С помощью технологии SELEX был проведён отбор аптамеровПоказать полностью, нацеленных на клетки РМЖ. Селекция включала пози тивные раунды против гомогенизированных опухолевых тканей РМЖ и негативные раунды против здоровой ткани молочной железы и крови доноров. Аффинность и специфичность отобранных аптамеров оценивали с помощью проточной цитометрии на первичных клетках РМЖ и лимфоцитах здоровых доноров. Для детекции ЦОК в клинических образцах крови пациенток с РМЖ была разработана проточно-цитометриче ская методика с использованием пула аптамеров в комбинации с антителами к CD45, EpCAM и ядерным красителем DAPI. Результаты. Показано, что отобранные аптамеры эффективно и специфично связываются с первичными клетками РМЖ (40-90% позитивных клеток), демонстрируя при этом минимальное связывание с лимфоцитами здоровых доноров. При анализе клинических образцов крови 14 паци енток с РМЖ аптамеры позволили выявить гетерогенные субпопуляции ЦОК. У части пациенток были обнаружены только EpCAM-позитивные (аптамер-негативные) клетки, что может указывать на благоприятный прогноз, в то время как у других выявлены аптамер-позитивные клетки, ассоциированные с мезенхимальным фенотипом и повышенным метастатическим потенциалом. В некоторых образцах наблюдалось образова ние комплексов аптамер-позитивных клеток с лимфоцитами, что может свидетельствовать об иммунном ответе. Заключение. В исследовании успешно разработана панель высокоспецифичных ДНК-аптамеров для детекции ЦОК при РМЖ. Оптимизирован ный проточно-цитометрический метод на основе аптамеров показал высокую чувствительность и способность выявлять гетерогенные популя ции опухолевых клеток, что имеет важное значение для прогнозирования течения заболевания. The aim of the research. Selection of high-specificity DNA aptamers for detection of circulating tumour cells (CTCs) in the peripheral blood of breast cancer (BC) patients and development of a flow cytometry-based detection method using an aptamer pool. Material and methods. Using SELEX technology, aptamers targeting breast cancer cells were selected. The selection process included positive rounds against homogenised BC tumour tissues and negative counter-selection rounds against healthy breast tissue and donor blood. The affinity and specificity of the selected aptamers were evaluated using flow cytometry on primary BC cells and lymphocytes from healthy donors. For detection of CTCs in clinical blood samples from BC patients, a flow cytometry method was developed utilising a pool of aptamers in combination with antibodies to CD45 and EpCAM, and the DAPI nuclear dye. Results. It has been demonstrated that the selected aptamers effectively and specifically bind to primary breast cancer cells (40-90% positive cells), while showing minimal binding to lymphocytes from healthy donors. In the analysis of clinical blood samples from 14 breast cancer patients, the aptamers enabled the detection of heterogeneous CTC subpopulations. In a subset of patients, only EpCAM-positive (aptamer-negative) cells were detected, which may indicate a favourable prognosis, whereas in others, aptamer-positive cells associated with a mesenchymal phenotype and increased metastatic potential were identified. The formation of complexes between aptamer-positive cells and lymphocytes was observed in some samples, which is potentially indicative of an immune response. Conclusion. This study successfully developed a panel of highly specific DNA aptamers for detection of CTCs in breast cancer. The optimised aptamer-based flow cytometry method demonstrated high sensitivity and the ability to detect heterogeneous populations of tumour cells, which is of significant importance for disease prognosis.
Журнал: Сибирское медицинское обозрение
Выпуск журнала: № 6
Номера страниц: 84-92
ISSN журнала: 18199496
Место издания: Красноярск
Издатель: Красноярский государственный медицинский университет им. проф. В.Ф. Войно-Ясенецкого