Тип публикации: доклад, тезисы доклада, статья из сборника материалов конференций
Конференция: Белки и пептиды; Петрозаводск; Петрозаводск
Год издания: 2011
Аннотация: Как известно, изменяя структуру белка с помощью сайт-направленного мутагенеза и наблюдая за изменением его свойств, можно делать выводы о функциональной значимости тех или иных участков белковой молекулы. Ранее нами был клонирован и экспресснрован OmpF порин возбудителя псевдотуберкулёза Yersinia pseudotuberculosis [1], а также иссПоказать полностьюледованы его структурно-функциональные и иммунобиологические свойства. Согласно литературным данным наружные петли неспецифических поринов грамотрицательных бактерий входят в состав антигенных детерминант, а также участвуют в стабилизации тримеров белка и модуляции проводимости пориновых каналов. На первом этапе исследования для получения мутантных конструкций, несущих ompF ген с делениями внешних петель (LI, L2, L4-L8), была использована Pfu Turbo ДНК полимераза (Stratagene, США) с применением мутантных праймеров. Наличие делеций в экспрессионной плазмиде контролировалось при помощи секвенирования. Экспрессия целевых белков проводилась в штамме Roselta Escherichia coli (Novagen, США). Выделение из телец включения и рефолдинг мутантных белков с делециями по петлям L1, L6 и L8 проводились по методике, отработанной для выделения рекомбинантного OmpF порина Y. pseudotuberculosis [1]: путем исчерпывающего диализа и ионообменной хроматофафии. В результате мутантные белки получены в олигомерной форме. С помощью иммуноблоттинга и техники БЛМ показано, что в случае OmpF порина из Y. pseudotuberculosis отсутствие вышеуказанных петель в структуре белка существенно не влияет на его антигенную и функциональную активность. Работа поддержана грантами РФФИ № 08-08-00823-а "Конструирование и исследование неспецифических порообразующих белков грамотрицательных бактерий с измененными структурно-функциональными свойствами" и ДВО РАН "Конструирование и структурно-функциональное исследование мутантных OmpF поринов наружной мембраны Yersinia pseudotuberculosis".
Журнал: Белки и пептиды
Номера страниц: 309-309
Место издания: Петрозаводск
Издатель: Карельский научный центр Российской академии наук